口蹄疫病毒 O 亚型病毒 RT-PCR 检测试剂盒

口蹄疫（foot-and-mouth disease，FMD）由口蹄疫病毒（FMDV）引起
的多种偶蹄动物高度接触性传染病。口蹄疫病毒属于小核糖核酸病毒科口蹄疫病
毒属，病毒基因组为单股正链 RNA，约含 8500 个核苷酸。目前已知该病毒有 7
个血清型，分别为 O、A、C、Asial、SATl、SAT2 和 SAT3，每种血清型包括
多个亚型，各型之间无交叉保护。我国及周边国家流行 O 型、A 型和 Asial 型 3
种血清的 FMDV。口蹄疫病对畜牧业生产危害性极大，是世界各国检测和防疫
的重点对象。由于 FMDV 传代速度快且有多种传播途径，特别是康复和亚临床
感染动物及其畜产品（主要为肉、奶类）带毒，给 FMD 的防疫工作带来诸多困
难。目前检测 FMD 常用技术主要有动物接种，病毒分离和血清学试验等，这些
方法有的费时费力，有的存在非特异性反应和敏感度低等缺点。
本公司针对 O 型 FMDV 设计了特异性检测引物，建立了检测 FMDV 的
RT-PCR 方法，敏感度更高。它具有下列特点：
1. 用于 O 型 FMDV 的定性鉴定检测和分子流行病学调查。
2. 能对样品中 FMDV 进行快速检测，具有良好的特异性和敏感性。
3. 使用一管式 RT-PCR 试剂盒，减少了操作步骤，降低了操作误差。

运输及保存:

使用方法:

一、样品 RNA 的制备
用自选方法纯化 O 型 FMDV 样品的 RNA，也可以另购本公司的一管式病
毒 RANout 或柱式病毒 RNAout，上述两款产品跟本试剂盒兼容。
二、阳性对照
1. 为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对
照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
2. 使用本阳性对照时，由于其浓度较高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。
最好在专门的区域操作。
三、设置 RT-PCR 反应（30 uL 体系）
3. 在 PCR 管中加入下列成分：
成 份 样品 阳性对照 阴性对照
双酶一管式 RT-PCR Buffer，2× 15 uL 15 uL 15 uL
O 型 FMDV 专一性引物对 2 uL 2 uL 2 uL
样品 RNA 1-5 uL 无 无
O 型 FMDV 阳性对照 无 2 uL 无
补超纯水到 28 uL 28 uL 28 uL
MMLV-Taq Mix 2 uL 2 uL 2 uL
4. 轻柔混匀后上机，按下面参数进行 RT-PCR。
过程 温度 时间
逆转录 60℃ 30 分钟
预变性 95℃ 5 分钟
PCR 反应
（30 个循环）
94℃ 30 s
61℃ 40 s
72℃ 1 分钟
延伸 72℃ 10 分钟
5. 电泳检测 RT-PCR 产物。预期的 PCR 产物长度为 402 bp。