猪流行性腹泻病毒 RT-PCR 检测试剂盒

猪流行性腹泻(Porcine Epidemic Diarrhea，PED)是由猪流行性腹泻病毒
(PEDV)引起的一种急性、高度接触性肠道传染病，对养猪业的危害极大，所以
及早确诊对该病的防治具有特别重要的意义。猪流行性腹泻病毒的传统诊断方法
主要有病毒的分离鉴定、免疫荧光抗体试验、免疫电镜观察和 ELISA 等方法。
但这些方法操作过程繁琐、操作难度大，所需要时间较长，专一性不强因此建立
一种快速、高灵敏度的诊断方法对防治 PEDV 感染是十分必要的。
PEDV 属于冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)，其基因
组为单链正股 RNA，其中膜蛋白(M)基因高度保守。本研究根据 PEDV 的 M 基
因设计特异性检测引物，提供了 PEDV 的快速、灵敏的鉴别诊断方法，采用
RT-PCR 技术检测疑似感染仔猪粪便或肠道组织样品中的 PEDV。它具有下列
特点：
1. 用于 PEDV 的定性鉴定检测和分子流行病学调查。
2. 能对样品中 PEDV 进行快速检测，具有良好的特异性和敏感性。
3. 使用一管式 RT-PCR 试剂盒，减少了操作步骤，降低了操作误差

运输及保存:

使用方法:

一、样品 RNA 的制备
将 PEDV 细胞毒、腹泻仔猪粪便或肠道组织样品剪成小块，加入 5 倍体积
PBS，匀浆处理或组织研磨器研磨，用自选方法纯化 PEDV 样品的 RNA，也可
以另购本公司的一管式病毒 RANout 或柱式病毒 RNAout，上述两款产品跟本
试剂盒兼容。
二、阳性对照
1. 为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对
照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
2. 使用本阳性对照时，由于其浓度较高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。
最好在专门的区域操作。
三、设置 RT-PCR 反应（30 uL 体系）
3. 在 PCR 管中加入下列成分：
成 份 样品 阳性对照 阴性对照
双酶一管式 RT-PCR Buffer，2× 15 uL 15 uL 15 uL
PEDV 专一性引物对 2 uL 2 uL 2 uL
样品 RNA 1-5 uL 无 无
PEDV 阳性对照 无 2 uL 无
补超纯水到 28 uL 28 uL 28 uL
MMLV-Taq Mix 2 uL 2 uL 2 uL
4. 轻柔混匀后上机，按下面参数进行 RT-PCR。
过程 温度 时间
逆转录 60℃ 30 分钟
预变性 95℃ 5 分钟
PCR 反应
（35 个循环）
95℃ 30 s
52℃ 30 s
72℃ 30 s
延伸 72℃ 7 分钟
5. 电泳检测 RT-PCR 产物。预期的 PCR 产物长度为 457 bp。