猪传染性胃肠炎病毒 RT-PCR 检测试剂盒

猪传染性胃肠炎（Transmissible gastroenteritis，TGE）是由冠状病毒
科的传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus，TGEV）引起
的猪的一种高度接触性传染病，其临床症状以呕吐、严重腹泻和脱水性肠炎为主
要特征。不同年龄和品种的猪均易感，尤其对 2 周龄以内的仔猪致死率高达
100％，给养猪业造成巨大经济损失。TGEV 为不分节段的单股正链 RNA 病毒，
具有 4 种结构蛋白，其中编码病毒核衣壳（N）蛋白的 N 基因高度保守，故 N
基因可被作为 RT-PCR 诊断的最佳基因。本试验根据 N 基因序列设计特异性检
测引物，建立了检测 TGEV 的 RT-PCR 方法。它具有下列特点：
1. 用于 TGEV 的定性鉴定检测和分子流行病学调查。
2. 能对样品中 TGEV 进行快速检测，具有良好的特异性和敏感性。
3. 使用一管式 RT-PCR 试剂盒，减少了操作步骤，降低了操作误差。

运输及保存:

使用方法:

一、样品 RNA 的制备
用自选方法纯化 TGEV 样品的 RNA，也可以另购本公司的一管式病毒
RANout 或柱式病毒 RNAout，上述两款产品跟本试剂盒兼容。
二、阳性对照
1. 为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对
照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
2. 使用本阳性对照时，由于其浓度较高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。
最好在专门的区域操作。
三、设置 RT-PCR 反应（30 uL 体系）
3. 在 PCR 管中加入下列成分：
成 份 样品 阳性对照 阴性对照
双酶一管式 RT-PCR Buffer，2× 15 uL 15 uL 15 uL
TGEV 专一性引物对 2 uL 2 uL 2 uL
样品 RNA 1-5 uL 无 无
TGEV 阳性对照 无 2 uL 无
补超纯水到 28 uL 28 uL 28 uL
MMLV-Taq Mix 2 uL 2 uL 2 uL
4. 轻柔混匀后上机，按下面参数进行 RT-PCR。
过程 温度 时间
逆转录 60℃ 30 分钟
预变性 95℃ 3 分钟
PCR 反应
（35 个循环）
94℃ 30 s
55℃ 40 s
72℃ 30 s
延伸 72℃ 7 分钟
5. 电泳检测 RT-PCR 产物。预期的 PCR 产物长度为 224 bp