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即用型PCR检测试剂盒

猪传染性胃肠炎病毒 RT-PCR 检测试剂盒

文字:[大][中][小] 2017-6-4    浏览次数:1376    
产品及特点:


猪传染性胃肠炎(Transmissible gastroenteritis,TGE)是由冠状病毒
科的传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)引起
的猪的一种高度接触性传染病,其临床症状以呕吐、严重腹泻和脱水性肠炎为主
要特征。不同年龄和品种的猪均易感,尤其对 2 周龄以内的仔猪致死率高达
100%,给养猪业造成巨大经济损失。TGEV 为不分节段的单股正链 RNA 病毒,
具有 4 种结构蛋白,其中编码病毒核衣壳(N)蛋白的 N 基因高度保守,故 N
基因可被作为 RT-PCR 诊断的最佳基因。本试验根据 N 基因序列设计特异性检
测引物,建立了检测 TGEV 的 RT-PCR 方法。它具有下列特点:
1. 用于 TGEV 的定性鉴定检测和分子流行病学调查。
2. 能对样品中 TGEV 进行快速检测,具有良好的特异性和敏感性。
3. 使用一管式 RT-PCR 试剂盒,减少了操作步骤,降低了操作误差。


运输及保存:



 低温运输,-20℃保存,保存期限一年。


使用方法:


一、样品 RNA 的制备
用自选方法纯化 TGEV 样品的 RNA,也可以另购本公司的一管式病毒
RANout 或柱式病毒 RNAout,上述两款产品跟本试剂盒兼容。
二、阳性对照
1. 为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对
照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
2. 使用本阳性对照时,由于其浓度较高,一定要注意不要污染其他试剂和成分。
最好在专门的区域操作。
三、设置 RT-PCR 反应(30 uL 体系)
3. 在 PCR 管中加入下列成分:
成 份 样品 阳性对照 阴性对照
双酶一管式 RT-PCR Buffer,2× 15 uL 15 uL 15 uL
TGEV 专一性引物对 2 uL 2 uL 2 uL
样品 RNA 1-5 uL 无 无
TGEV 阳性对照 无 2 uL 无
补超纯水到 28 uL 28 uL 28 uL
MMLV-Taq Mix 2 uL 2 uL 2 uL
4. 轻柔混匀后上机,按下面参数进行 RT-PCR。
过程 温度 时间
逆转录 60℃ 30 分钟
预变性 95℃ 3 分钟
PCR 反应
(35 个循环)
94℃ 30 s
55℃ 40 s
72℃ 30 s
延伸 72℃ 7 分钟
5. 电泳检测 RT-PCR 产物。预期的 PCR 产物长度为 224 bp

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