牛腺病毒 3 型荧光定量 PCR 检测试剂盒

牛血清的质量控制标准中有一项重要的指标是病毒的检测。比较常见的易感
染奶牛和肉牛的病毒如 DNA 病毒：牛腺病毒 3 型（Bobine Adenovirus Type 3，
BAV-3），主要引起牛的呼吸道和肠道疾病，其主要特征为肺炎、肠炎、结膜炎
和多发性关节炎，是犊牛死亡的重要原因之一。其易感和潜伏性给畜牧业及其国
际贸易带来严重的经济损失，同时，给细胞培养以及相关基础研究带来一定的问
题。因此，病毒的快速检测是控制牛血清质量的前提，除了传统的培养传代观察
细胞病变，血清学诊断技术外，我们在这里引入荧光定量 PCR 的方法，来快速
检测血清样品中是否污染有 BAV-3。本产品是根据BAV-3核酸序列的保守区pol
蛋白酶设计引物，定制的一种检测 BAV-3 的荧光定量 PCR 试剂盒。它具有下列
特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板即可使用。
2. 快捷，整个 PCR 过程只要一小时。
3. 灵敏度达达 100copies/reactlon 水平。
4. 荧光 PCR mix 中含第二代饱和型荧光染料，效果好于 SYBR Green I。
5. 密封体系，极大降低了假阳性。
6. 本产品跟各种荧光 PCR 仪器兼容。

运输及保存:

使用方法:

一、样品 DNA 的制备（本试剂盒不含所需试剂）
用自备试剂抽提病毒样品 DNA。注意：可以选用本公司的病毒 DNAout 或柱
式病毒 DNAout。
二、荧光 PCR 反应（25 uL 体系） 
1. 配制标准品，用 DNA 稀释液将 BAV-3 标准品（1.27X10E11 拷贝/uL）稀
释到不同的浓度，每个浓度差 10 倍，共 8-10 个梯度。此标准品系列将用于
制作标准曲线。
2. 设置 PCR 反应：在 PCR 管中加入下列成分（N 取决于上步的稀释梯度由客
户自己决定）：
成分 样品管
标准坪梯度
（共 8-10 管）
阴性对照
2×荧光 PCR Mix 12.5 uL 12.5 uL 每管 12.5 uL
待检测样品 DNA（自备） 1-5 uL 无 无
标准品(8-10 个梯度) 无 N uL 每管 无
BAV-3 专一性引物一 2 uL 2 uL 2 uL
BAV-3 专一性引物二 2 uL 2 uL 2 uL
补超纯水到 25 uL 25 uL 25 uL
3. 上机进行荧光定量 PCR。荧光定量 PCR 反应参数如下（以 ABI7500 荧光定
量 PCR 仪为参考）：
过程 温度 时间
预变性 94℃ 2 min
两步式 PCR 反应
（40 个循环）
94℃ 30 s
60℃ 90 s
4. 根据 8-10 管标准品的 Ct 值（x 轴）和浓度（y 轴）描出标准曲线，再根据
待测样品的 Ct 值技术按出样品的浓度。