牛病毒性腹泻病毒 RT-PCR 检测试剂盒

牛病毒性 腹泻 -- 粘膜病（ Bovine viral diarrheamucosal disease ，
BVD-MD）是由牛病毒性腹泻病毒（Bovine viml diarrheamucosal disease
virus，BVDV）引起的以粘膜収炎、糜烂、坏死和腹泻等特征为主的疾病。该病
在世界各地广泛流行和传播，一些畜牧业収达的国家尤其严重。因此，BVDV 的
快速准确鉴定，对该病的预防和检疫有着重要作用。为此本公司开収了本产品，
采用 RT-PCR 技术检测疑似感染动物血清或组织中的 BVDV。它具有下列特点：
1. 用于 BVDV 的定性鉴定检测和分子流行病学调查。
2. 能对样品中 BVDV 进行快速检测，具有良好的特异性和敏感性。
3. 使用一管式 RT-PCR 试剂盒，减少了操作步骤，降低了操作误差。

运输及保存:

使用方法:

一、样品 RNA 的制备
用自选方法纯化 BVDV 样品的 RNA，也可以另购本公司的一管式病毒
RANout 或柱式病毒 RNAout，上述两款产品跟本试剂盒兼容。
二、阳性对照
1. 为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品丌提供活体病毒做阳性对
照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
2. 使用本阳性对照时，由于其浓度较高，一定要注意丌要污染其他试剂和成分。
最好在专门的区域操作。
三、设置 RT-PCR 反应（30 uL 体系）
3. 在 PCR 管中加入下列成分：
成 份 样品 阳性对照 阴性对照
双酶一管式 RT-PCR Buffer，2× 15 uL 15 uL 15 uL
BVDV 专一性引物对 2 uL 2 uL 2 uL
样品 RNA 1-5 uL 无 无
BVDV 阳性对照 无 2 uL 无
补超纯水到 28 uL 28 uL 28 uL
MMLV-Taq Mix 2 uL 2 uL 2 uL
4. 轻柔混匀后上机，按下面参数进行 RT-PCR。
过程 温度 时间
逆转录 42℃ 30 min
预变性 95℃ 3 min
PCR 反应
（35 个循环）
95℃ 30 s
58℃ 15 s
72℃ 30 s
延伸 72℃ 10 min
5. 电泳检测 RT-PCR 产物。预期的 PCR 产物长度为 244 bp