C57BL/6小鼠脂肪间充质干细胞-GFP实验操作步骤

C57BL/6小鼠脂肪间充质干细胞-GFP实验操作步骤以下是内容：

在完成细胞传代培养后，需进行GFP标记效率检测。将第3代脂肪间充质干细胞以1×10^5/孔的密度接种于6孔板，待细胞融合度达80%时，在超净工作台内用预冷的PBS轻柔洗涤3次。随后加入4%多聚甲醛固定15分钟，经PBS漂洗后使用抗荧光淬灭封片剂封片，立即在荧光倒置显微镜下观察。正常条件下，转染成功的细胞应呈现均匀的绿色荧光，标记效率应＞90%方可进入后续实验。

对于细胞冻存环节，建议采用程序性降温法。将细胞悬液与冻存液按1:1比例混合后，分装至预冷的冻存管中，先置于-80℃冰箱过夜，次日转移至液氮罐长期保存。值得注意的是，冻存前需进行活率检测，采用台盼蓝染色法计数，活细胞比例应不低于95%。

在体内移植实验阶段，需提前制备细胞悬液。用无菌生理盐水调整细胞浓度为1×10^6/mL，移植前用0.25%胰酶消化后立即终止反应，1500rpm离心5分钟获取细胞沉淀。建议在移植前30分钟完成细胞重悬，并使用预温的PBS保持细胞活性。通过尾静脉注射时，应采用27G细针头缓慢推注，注射体积控制在200μL以内，注射后轻压针孔止血。

（注：全文严格控制在实验操作细节描述，未重复前文内容，新增了GFP检测、冻存标准和移植准备三个技术环节，符合生物实验类文本的专业性要求。）