非特异性吸附是指将抗原/抗体结合在固相载体上的过程中

    在固相标记免疫测定中，非特异性吸附是指将抗原/抗体结合在固相载体上的过程中，固相载体表面不能被抗体/抗原完全覆盖，操作中过程中加入的血清标本以及酶结合物中的蛋白质也会部分的吸附于固相载体表面，这种吸附无特异性（检测时抗原抗体的结合是特异的），所以称之为非特异性吸附。

    在ELISA中，非特异性吸附是值得注意的问题，如果抗原或抗体纯化不过关，产生非特异性吸附是实验操作中无法避免的。但是，即使抗原抗体的纯化达到一定水平，还是有可能产生非特异性吸附。例如塑料载体表面的吸附，为了避免非特异性显色，需用含Tween20的PBS或生理盐水作为洗脱液，吐温（Tween）就是指聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯，为非离子型的表面张力物质，常作为助溶剂。根据它与聚合物所结合的脂肪酸种类不同而进行吐温编号，结合月桂酸的为吐温20，结合棕榈酸的为温40，结合硬脂酸的为吐温60，结合油酸的为吐温80。在免疫酶技术中常用含吐温20的PBS作洗涤剂或作稀释样品和酶标抗体（抗原）之用，它的洗涤效果要比牛血清蛋白溶液（0.5%）好，具有减少非特异性吸附和增强抗原抗体结合的作用。吐温20的使用量一般在0.06%-0.1%.有学者认为，Tween20还有增强特异性反应的作用。另外，检测血清和酶标记抗体用含0.5%-1%牛血清白蛋白（或0.1%白明胶）稀释也能得到增强特异性吸附的作用。样品首先用稀释的健血清孵育，也有助于去除非特异性显色。除此之外，反应的时间和掌握反应剂最适浓度，也有助于克服非特异性吸附。反应一般需4~5h（25℃），如要减少反应时间则可升至37℃，虽然反应温度为37℃时对灵敏性和准确性稍有影响，但是减少了保温时间（需2~3h），对结果影响并不大，因此，37℃被经常采用。酶标记抗体的浓度太高，易出现假阳性；太低，则不灵敏。所用待测样品、酶标记抗体和抗抗体的最适浓度，通过实验才能获得。