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小肠结肠炎耶尔森氏菌(YE)核酸检测试剂盒反应五要素

文字:[大][中][小] 2021-1-19    浏览次数:210    

小肠结肠炎耶尔森氏菌(YE)核酸检测试剂盒反应五要素:


参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+


引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:


①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。


②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。


③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。


④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。


⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。


⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。


⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。


引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。

人尿素酶相关蛋白C(UreC)ELISA检测试剂盒

人尿皮素ELISA检测试剂盒

人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)ELISA检测试剂盒

人尿激酶型纤溶酶原激活物受体(PLAUR/uPAR)ELISA检测试剂盒

人尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)ELISA检测试剂盒

人尿激酶(UK)ELISA检测试剂盒

人尿苷二磷酸葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶(UGCG)ELISA检测试剂盒

人尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶2(UGT2)ELISA检测试剂盒

人尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1(UGT1)ELISA检测试剂盒

人鸟苷酸结合蛋白4(Gbp4)ELISA检测试剂盒

人鸟苷酸交换因子(GEF)ELISA检测试剂盒

人鸟氨酸脱羧酶(ODC)ELISA检测试剂盒

人黏着斑激酶(FAK)ELISA检测试剂盒

人黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1)ELISA检测试剂盒

人黏多糖/糖胺聚糖ELISA检测试剂盒

人脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA检测试剂盒

人脑啡肽(ENK)ELISA检测试剂盒

人脑肠肽(BGP/Gehrelin)ELISA检测试剂盒

人囊虫病抗体(CYT Ab)ELISA检测试剂盒

人难辨梭状芽孢杆菌毒素B(TOXB)ELISA检测试剂盒

人难辨梭状芽孢杆菌毒素A(TOXA)ELISA检测试剂盒

人钠-氯化物依赖性牛磺酸转运体(SLC6A6/TAUT)ELISA检测试剂盒


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