上海研生实业​大鼠血管组织提取物实验报告

上海研生实业大鼠血管组织提取物实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

   

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
人神经星形胶质细胞完全培养基
人神经小胶质细胞完全培养基
人脑微血管内皮细胞完全培养基
人脑成纤维细胞完全培养基
人小脑颗粒细胞完全培养基
人晶状体上皮细胞完全培养基
人角膜上皮细胞完全培养基
人视网膜色素上皮细胞完全培养基
人视网膜微血管内皮细胞完全培养基
人角膜成纤维细胞完全培养基
人小梁网细胞完全培养基
人视网膜muller细胞完全培养基
人角膜内皮细胞完全培养基
人脉络膜微血管细胞完全培养基
人牙周膜成纤维细胞完全培养基
大鼠肺微血管内皮细胞完全培养基
大鼠肺血管平滑肌细胞完全培养基
大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞完全培养基
大鼠气管上皮细胞完全培养基
大鼠气管平滑肌细胞完全培养基