异源曼氏杆菌探针法荧光定量PCR检测试剂盒使用方法

异源曼氏杆菌探针法荧光定量PCR检测试剂盒使用方法：

一、样品DNA的制备

用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。产品仅用于科研

二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DN段作为阳性对照。

1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。

2. 用带芯枪头分别加入45 μL超纯水（用带芯枪头，下同）。

3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或超纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。

4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。

5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。

6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。

7. NC管中不加任何阳性对照。

8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。

犬抑制素β-B(Inhbb)elisa检测试剂盒
犬乙型肝炎表面抗原(HBsAg)elisa检测试剂盒
犬乙酰胆碱受体抗体(AChRab)elisa检测试剂盒
犬胰腺甘油三酯脂酶(PNLIP)elisa检测试剂盒
犬胰高血糖素样肽1(GLP1)elisa检测试剂盒
犬胰岛素原(PI)elisa检测试剂盒
犬胰岛素样因子3(INSL3)elisa检测试剂盒
犬胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)elisa检测试剂盒
犬胰岛素样生长因子II(IGF2)elisa检测试剂盒
犬胰岛素样生长因子1(IGF1)elisa检测试剂盒
犬胰岛素受体β(ISR-β)elisa检测试剂盒
犬胰岛素(INS)elisa检测试剂盒
犬胰蛋白酶原激活肽(TAP)elisa检测试剂盒
犬胰蛋白酶原-1 elisa检测试剂盒
犬胰蛋白酶(trypsin)elisa检测试剂盒
犬一氧化氮(NO)elisa检测试剂盒
犬叶酸(FA)elisa检测试剂盒
犬血纤蛋白原降解产物(FDP)elisa检测试剂盒
犬血纤蛋白原(Fbg)elisa检测试剂盒
犬血栓素B2(TXB2)elisa检测试剂盒