血液RNA提取的方法有哪两类及它们的注意事项

血液RNA提取的方法可以细分为需要预先处理和不需要预先处理两类。
       众所周知，人和其他哺乳动物血液只有白细胞（不到总数的 5%）等少量细胞含有RNA，需要预先处理的血液 RNA 提取法其实就是分离白细胞再提取RNA， 本质上是白细胞RNA提取。分离白细胞的方法有 Ficoll-Hypaque 密度离心法（白细胞在 Buffy Coat 中)和红细胞裂解法。由于预处理操作会剧烈改变血液RNA含量（British J. Haematol.， 126:231， 2004），所以无预处理 提取法将是未来提取血液RNA的发展方向。
白细胞RNA提取和全血RNA提取都需注意以下问题：
一、血液越新鲜越 好，因血液细胞内外都有大量 RNase，容易使RNA降解。血液在 4℃的放置 时间最好不要超过四天；
二、尽可能抑制或灭活血液特有的RNase（如 EDN， ECP），因为它们不但跟 RNase A 一样非常稳定，而且不被 RNase Inhibitor 和 RVC 抑制，还能抑制逆转录酶的活性，它们残留在RNA样品中不但会降解RNA，还会干扰后续的RT-PCR反应；
三，血液富含糖蛋白，粘蛋白和血红蛋白，提取需要去除糖蛋白污染；
四，由于RNA量少，提取时很容易丢失， 可以适当使用核酸沉淀助沉剂；
五，血液细胞量随生理病理因素变化波动性大， 注意调整血液和提取试剂的最佳用量。 最简单的方法是使用已经经过厂家优化的产品，比如用于白细胞RNA提取的 TRIzol、QIAamp RNA Blood Mini Kit 和xuanya的动物 RNAOUT；用于全血RNA 提取的 TRIzol LS，PAXgene Blood RNA Kit 和xuanya的全血RNAOUT和柱式血液RNAOUT。