如何判断ELISA试剂盒的线性范围是否达标

1. 标准曲线R²值验证
‌要求‌：线性相关系数（R²）应≥0.99，表明浓度与信号值呈显著线性关系。
‌操作‌：使用5-7个浓度点绘制标准曲线，采用四参数逻辑斯蒂（4-PL）拟合，若R²不达标需检查标准品纯度或稀释精度。
2. 样本基质适配性测试
‌方法‌：通过加标回收实验验证基质效应，回收率需在80%-120%之间。
‌步骤‌：
制备基础样本（待测样本+空白基质）和加标样本（加入高、中、低浓度标准液）。
同步检测后计算回收率，若偏差超限需调整稀释液或前处理步骤。
3. 干扰物质控制实验
‌常见干扰‌：胆红素、血红蛋白等内源性物质可能抑制信号。
‌解决方案‌：使用含BSA的PBS稀释样本，或通过Youden曲线量化干扰程度。
4. 加标回收实验
‌操作‌：
加标体积≤样本体积10%，避免基质效应。
计算回收率：(测定浓度 - 基础浓度) / 加入浓度 × 100%。
‌标准‌：平均回收率应在80%-120%内，且变异系数（CV）<15%。
‌总结‌：线性范围达标需同时满足R²≥0.99、回收率80%-120%、无显著基质干扰。若未通过，需优化标准品配制或样本前处理。