环孢子虫探针法荧光定量PCR的原理是什么

    环孢子虫探针法荧光定量PCR（qPCR）的核心原理基于‌TaqMan探针技术‌，通过荧光信号的实时监测实现目标DNA的定量分析。其具体机制如下：

‌探针设计‌
探针为一段与环孢子虫目标序列互补的寡核苷酸，两端分别标记‌荧光报告基团（如FAM）‌和‌淬灭基团（如TAMRA）‌。当探针完整时，报告基团的
荧光被淬灭基团吸收，无信号输出‌。

‌PCR扩增与探针降解‌

‌退火阶段‌：探针与目标DNA结合，形成杂交双链。
‌延伸阶段‌：Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放报告基团，荧光信号被检测系统捕获‌。
‌信号累积‌：每扩增一条DNA链，对应一个荧光分子释放，信号强度与目标DNA量呈正比‌。
‌定量分析‌
通过监测荧光信号达到阈值（Ct值）所需的循环数，结合标准曲线计算初始模板浓度‌。

技术优势
‌高特异性‌：探针仅与目标序列结合，避免非特异性扩增干扰‌。

‌高灵敏度‌：可检测低至100拷贝的模板‌。

‌封闭反应‌：无需开盖操作，减少污染风险‌。

与染料法的区别
探针法通过特异性探针识别目标序列，而染料法（如SYBR Green）仅结合所有双链DNA，特异性较低但成本更低‌。