兔抗人多克隆抗体 BRCA操作步骤

兔抗人多克隆抗体 BRCA操作步骤

1 . 切片常规脱蜡至水。如需抗原修复,可在此步后进行

⒉ 缓冲液洗  3min/2  次。

⒊ 为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色,将切片放在  Hydrogen Peroxide Block  中孵育  10-15  分钟。

⒋ 缓冲液洗  5min/2  次。

⒌ 滴加  Ultra V Block  , 在室温下孵育  5  分钟以封闭非特异性的背景染色。

(注:孵育不要超过  10  分钟,否则会导致特异性染色降低。如果一抗的稀释液中含有  5  -  10%  正常羊血清,这一步可以省略。)

⒍ 缓冲液洗  5min/2  次。

⒎ 滴加一抗工作液  37  ℃孵育  1  -  2  小时。(具体孵育时间和温度由试验者最终决定)

⒏ 缓冲液洗  5min/2  次。

9  . 滴加  Primary Antibody Enhancer (增强子),在室温下孵育  20  分钟。

10  .缓冲液洗  5min/2  次。

11  .滴加  HRP Polymer (酶标二抗) ,在室温下孵育  30  分钟。

(注: HRP Polymer  对光敏感,应避免不必要的光暴露并储存在不透明的小瓶中。)

12  .缓冲液洗  5min/2  次。

13  .向  1ml DAB Plus Substrate  (或  AEC Plus Substrate)  中滴加  1-2  滴  DAB Plus Chromogen  (或  AEC Plus Chromogen ),混匀后滴加到切片上,孵育  3  -  15  分钟。(具体时间由染色深浅决定。)

14  .自来水充分冲洗,复染 ,脱水,透明,封片。

H-97(人高转移肝癌细胞)
HCC94(人子宫鳞癌细胞（高分化）)
HCCLM3(人高转移肝癌细胞)
HEL(人红白细胞白血病细胞)
HELF(人胚肺成纤维细胞)
HO-8910PM(人高转移卵巢癌细胞)
Ishikawa(人子宫内膜癌细胞)
L-O2(人正常肝细胞)
M1(小鼠白血病细胞)
M14(人黑色素瘤细胞)
MA-891(小鼠乳腺癌高转移细胞)
MDA-MB-435(人乳腺癌高转移细胞)
MDA-MB-468(人乳腺癌细胞)
MKN-28(人胃癌高转移细胞)
MKN45(人胃癌细胞)
MuM-2B(人眼脉络黑色素瘤细胞)
MuM-2C(人眼脉络黑色素瘤细胞)
MV3(人黑色素瘤细胞)
MX-1(人乳腺癌细胞)
NCI-H1975(人肺腺癌细胞)
NCI-H460(人肺癌细胞)
NCI-H661(人大细胞肺癌细胞)
M-NFS-60 (小鼠白血病细胞G-CSF依赖性)
PA319(人大肠癌细胞)
PATU8988(人胰腺癌细胞)