兔抗人多克隆抗体 BRCA操作步骤
2022-6-14
兔抗人多克隆抗体 BRCA操作步骤
1 . 切片常规脱蜡至水。如需抗原修复,可在此步后进行
⒉ 缓冲液洗 3min/2 次。
⒊ 为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色,将切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分钟。
⒋ 缓冲液洗 5min/2 次。
⒌ 滴加 Ultra V Block , 在室温下孵育 5 分钟以封闭非特异性的背景染色。
(注:孵育不要超过 10 分钟,否则会导致特异性染色降低。如果一抗的稀释液中含有 5 - 10% 正常羊血清,这一步可以省略。)
⒍ 缓冲液洗 5min/2 次。
⒎ 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小时。(具体孵育时间和温度由试验者最终决定)
⒏ 缓冲液洗 5min/2 次。
9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer (增强子),在室温下孵育 20 分钟。
10 .缓冲液洗 5min/2 次。
11 .滴加 HRP Polymer (酶标二抗) ,在室温下孵育 30 分钟。
(注: HRP Polymer 对光敏感,应避免不必要的光暴露并储存在不透明的小瓶中。)
12 .缓冲液洗 5min/2 次。
13 .向 1ml DAB Plus Substrate (或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen ),混匀后滴加到切片上,孵育 3 - 15 分钟。(具体时间由染色深浅决定。)
14 .自来水充分冲洗,复染 ,脱水,透明,封片。
H-97(人高转移肝癌细胞)
HCC94(人子宫鳞癌细胞(高分化))
HCCLM3(人高转移肝癌细胞)
HEL(人红白细胞白血病细胞)
HELF(人胚肺成纤维细胞)
HO-8910PM(人高转移卵巢癌细胞)
Ishikawa(人子宫内膜癌细胞)
L-O2(人正常肝细胞)
M1(小鼠白血病细胞)
M14(人黑色素瘤细胞)
MA-891(小鼠乳腺癌高转移细胞)
MDA-MB-435(人乳腺癌高转移细胞)
MDA-MB-468(人乳腺癌细胞)
MKN-28(人胃癌高转移细胞)
MKN45(人胃癌细胞)
MuM-2B(人眼脉络黑色素瘤细胞)
MuM-2C(人眼脉络黑色素瘤细胞)
MV3(人黑色素瘤细胞)
MX-1(人乳腺癌细胞)
NCI-H1975(人肺腺癌细胞)
NCI-H460(人肺癌细胞)
NCI-H661(人大细胞肺癌细胞)
M-NFS-60 (小鼠白血病细胞G-CSF依赖性)
PA319(人大肠癌细胞)
PATU8988(人胰腺癌细胞)