狐狸源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒实验方法步骤

狐狸源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒实验方法步骤:

方法

1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix (2mM)             

4 μl     引物1(10pM)                 

2 μl     引物2(10pM)                 

2 μl     Taq酶 (2U/μl)               

1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。

2调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
人角膜上皮细胞完全培养基
人视网膜色素上皮细胞完全培养基
人视网膜微血管内皮细胞完全培养基
人角膜成纤维细胞完全培养基
人小梁网细胞完全培养基
人视网膜muller细胞完全培养基
人角膜内皮细胞完全培养基
人脉络膜微血管细胞完全培养基
人牙周膜成纤维细胞完全培养基
大鼠肺微血管内皮细胞完全培养基
大鼠肺血管平滑肌细胞完全培养基
大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞完全培养基
大鼠气管上皮细胞完全培养基
大鼠气管平滑肌细胞完全培养基
大鼠肺成纤维细胞完全培养基
大鼠支气管上皮细胞完全培养基
大鼠支气管成纤维细胞完全培养基
大鼠肺大静脉平滑肌细胞完全培养基
大鼠肺大动脉平滑肌细胞完全培养基
大鼠肺大动脉内皮细胞完全培养基
大鼠肺动脉成纤维细胞完全培养基
大鼠肺大静脉内皮细胞完全培养基
大鼠气管和支气管上皮细胞完全培养基
大鼠胰岛细胞完全培养基
大鼠胰腺星状细胞完全培养基
大鼠胰腺导管上皮细胞完全培养基
大鼠颌下腺上皮细胞完全培养基
大鼠腮腺细胞完全培养基
大鼠乳腺上皮细胞完全培养基

3结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。