猪肠道杯状病毒RT-LAMP试剂盒使用方法

猪肠道杯状病毒RT-LAMP试剂盒使用方法:

一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。

1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。

3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 DNA 的制备

7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。

8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。

三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照。

肌球蛋白轻链激酶(MYLK)重组蛋白

肌球蛋白重链1(MYH1)重组蛋白

肌球蛋白重链2(MYH2)重组蛋白

肌细胞生成素(MYOG)重组蛋白

肌原纤蛋白1(FBN1)重组蛋白

基质金属蛋白酶1(MMP1)重组蛋白

基质金属蛋白酶10(MMP10)重组蛋白

基质金属蛋白酶11(MMP11)重组蛋白

基质金属蛋白酶12(MMP12)重组蛋白

基质金属蛋白酶13(MMP13)重组蛋白

基质金属蛋白酶15(MMP15)重组蛋白

基质金属蛋白酶2(MMP2)重组蛋白

基质金属蛋白酶23A(MMP23A)重组蛋白

基质金属蛋白酶23B(MMP23B)重组蛋白

基质金属蛋白酶26(MMP26)重组蛋白

基质金属蛋白酶3(MMP3)重组蛋白

基质金属蛋白酶7(MMP7)重组蛋白

基质金属蛋白酶8(MMP8)重组蛋白

基质金属蛋白酶9(MMP9)重组蛋白

基质细胞衍生因子4(SDF4)重组蛋白

基质重塑关联蛋白5(MXRA5)重组蛋白

激活T-细胞核因子1(NFATC1)重组蛋白

激素敏感性脂肪酶(LIPE)重组蛋白

激肽释放酶10(KLK10)重组蛋白

激肽释放酶11(KLK11)重组蛋白