大鼠L-鼠乳酸脱氢酶(L-LDH) elisa试剂盒操作步骤

大鼠L-鼠乳酸脱氢酶(L-LDH) elisa试剂盒操作步骤：

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在di一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟。

A549, 人肺癌细胞系
SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株
A-375 [A375], 人恶性黑素瘤细胞株
A549/DDP, 人肺腺癌耐药细胞株
SP2/0, 小鼠骨髓瘤细胞
WM35, 人黑色素瘤细胞
BxPC-3, 人原位胰腺腺癌细胞株
U-2 OS, 人骨肉瘤细胞
WM451, 人黑色素瘤细胞
SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌细胞
C6, 大鼠脑胶质瘤细胞
UM-UC-3, 人膀胱移行细胞癌
Hela, 人宫颈癌细胞系
HNE2, 人鼻咽癌细胞系
SKOV3 [SK-OV-3], 人卵巢癌腺癌细胞系
786-O [786-0], 人肾透明腺癌细胞
HEC-1A, 人子宫内膜癌细胞系
Caki-1, 人肾透明细胞癌皮肤转移细胞
Ishikawa, 人子宫内膜癌细胞系
ACHN, 人肾细胞腺癌细胞
JEC, 人子宫内膜腺癌细胞系
BPH-1, 人前列腺增生细胞
RL95-2, 人子宫内膜腺癌细胞系
Ca Ski, 人宫颈癌细胞
MCF-7 [MCF7], 人乳腺癌细胞系
Raw264.7, 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞
GBC-SD, 人胆囊癌细胞
5637, 人膀胱癌细胞