冻存培养基冻存细胞的基础指南

      当从细胞库购买的冻存或正处于增殖期的细胞，可对其进行扩增和重新冻存。不过，冻存操作可能会对细胞的生长状态有所影响。下列实验方案为大家提供了一份使用无蛋白成份的冻存培养基冻存细胞的基础指南。

● 使用37°C水浴化冻无蛋白成份的冻存培养基或4°C条件下过夜化冻。

● 如果在水浴中进行化冻，请确保温度不要超过37°C，也勿将该产品延长时间置于37°C。

● 无蛋白成份的冻存培养基在使用前应置于4°C条件下彻底平衡。为获得最优结果，推荐大家使用能够控制变温速率的冰箱。如果缺少能够控制变温速率的冰箱，也可使用细胞冻存盒。

● 如需用酶试剂解离培养器皿表面的细胞，则需使用对应的终止溶液重悬细胞以中和酶的效果。

● 通过离心沉淀细胞。

● 去除上清液后，使用预冷的无蛋白成份的冻存培养基以5x10E5至3x10E6细胞/毫升的密度重悬细胞。

● 将细胞悬液分装至合适数量的冻存管中。

● 将细胞尽快冷却至4°C。

● 如果使用控制变温速率的冰箱:以每分钟降低1°C的速率冰冻样品，直至–40°C。之后按照每分钟降低2°C的速率降至–90°C左右。

● 如果使用细胞冻存盒:请按照说明书来准备冻存盒。

● 为获得最佳结果，推荐大家在细胞温度降至–80°C后，尽快将冻存管转移至液氮储存设备的气相中。

● 作为无蛋白成份的冻存培养基的替代品，可使用该冻存细胞推荐的基础培养基，添加10%胎牛血清(FBS)和10% DMSO进行细胞冻存。

请注意:由于冻存设备与个人技术之间的差异，我们无法确保使用本方案冻存的细胞在复苏后能够保持活力，我们也无法为研究用户实验室冻存细胞的效果进行担保。