PCR-SSCP扩增分析阐述

        PCR-SSCP(聚合酶链反应-单链构象多态性)分析技术是一种基于单链DNA构象差别的快速、敏感、有效地检测基因点突变的DNA多态方法。其基本原理是对已知有基因点突变的遗传病，在其突变位点附近设计引物进行PCR扩增，将扩增的产物取出一部分（一般为1pl），变性后在不含变性剂的中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳，由于单链DNA中碱基配对或聚集，当温度或变性剂等环境改变会引起不同的构象。 

      PCR产物稀释倍数、甘油浓度、电压、电泳温度几个重要的因素进行探讨.方法:通过应用PCR-SSCP方法结合核苷酸序列分析检测成都汉族群体98个个体人类补体第8成分(C8A)基因型频率分布.结果:凝胶浓度为8%,PCR产物稀释4倍,上样量为4μl,不加甘油,电压为200V,恒温电泳时,SSCP分析可得到满意的结果.结论:PCR-SSCP分析对不同的研究对象,其分析参数不同,需要对其分析条件进行最大优化,才能获得实验的成功.

      相同长度的单链DNA因其碱基顺序不同，甚至单个碱基的差异会形成不同的构象从而导致电泳时泳动速度不同。如靶DNA中发生碱基替代等改变时就会出现泳动变位，从而鉴别有无基因突变。例如，无过氧化氢酶症是一种常染色体隐性遗传病，患者过氧化氢酶活性只有正常人的0.2%~0.4%，杂合体血液中过氧化氢酶活性则处于中间水平。过氧化氢酶基因由13个外显子和12个内含子组成。应用”P标记PCR反应中底物方法，扩增第4个外显子和内含子附近的203bp片段，应用SSCP法可清楚地判断患者和杂合体。