小鼠阿立新Aelisa试剂盒实验操作步骤

小鼠阿立新Aelisa试剂盒实验操作步骤：
1. 取出试剂盒，室温（20-25℃）放置 30 分钟。
2. 分组：取出 96 孔板，根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准 品组（6 个浓度）、空白孔、待测样品组。 注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。
3. 加样：依照标准品的顺序分别加入 50ul 的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入 50ul 的蒸馏水；其余微孔中加入 50ul 的待测样本。
4. 加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入 100ul 的酶标溶液（空白对照孔除外）。
5. 温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于 37℃恒温孵育 1 小时。
6. 洗板：用稀释后的洗涤液注满每孔，静置 15-30s，充分清洗酶标板 5 次，用吸水纸彻底拍干。 7. 显色：各孔加入显色剂 A 液 50ul 后，再加入显色剂 B 液 50ul。
8. 终止：25-37℃下避光反应 10-15 分钟，加入 50ul 终止液。
9. 读板：在 450nm 波长读取各孔的 OD 值。 注：读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹，读板时间控制在终止反应后的 30 分钟内，以免影响准确性。
数据计算
1. 绘制标准曲线：各标准品 OD 值减去底色即减去空白孔 OD 值，以 6 个标准 品的 OD 值为纵坐标 y，以标准品的浓度为横坐标 x，绘制曲线图，如图示， 并计算出回归方程 y=ax+b。
2. 将待测样品的 OD 值代入方程式，计算各组样品浓度，再乘以稀释倍数，即 为样品的实际 ABP 浓度。
3. 敏感度：1.0 pg/ml