猪脑心肌炎病毒 RT-PCR 检测试剂盒

产品及特点:

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脑心肌炎病毒（Encephalomyocarditis Virus，EMCV）在分类上属小
RNA 病毒科，心肌病毒属，是一种无囊膜的单股正链 RNA 病毒。由 EMCV 引
起的猪脑心肌炎是猪的一种以脑炎、心肌炎或心肌周围炎为主要特征的急性传染
病，给养猪业造成了极大的经济损失。本产品适用于检测猪血清、脑、心肌以及
淋巴结等组织标本或病毒培养液中 EMCV 的 mRNA，适用于 EMCV 感染的辅
助诊断。它具有下列特点：
1. 用于 EMCV 的定性鉴定检测和分子流行病学调查。
2. 能对样品中 EMCV 进行快速检测，具有良好的特异性和敏感性。
3. 使用一管式 RT-PCR 试剂盒，减少了操作步骤，降低了操作误差

运输及保存:

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 低温运输，-20℃保存，保存期限一年。

使用方法:

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一、样品 RNA 的制备
用自选方法纯化 EMCV 样品的 RNA，也可以另购本公司的一管式病毒
RANout 或柱式病毒 RNAout，上述两款产品跟本试剂盒兼容。
二、阳性对照
1. 为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对
照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
2. 使用本阳性对照时，由于其浓度较高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。
最好在专门的区域操作。
三、设置 RT-PCR 反应（30 uL 体系）
3. 在 PCR 管中加入下列成分：
成 份 样品 阳性对照 阴性对照
双酶一管式 RT-PCR Buffer，2× 15 uL 15 uL 15 uL
EMCV 专一性引物对 2 uL 2 uL 2 uL
样品 RNA 1-5 uL 无 无
EMCV 阳性对照 无 2 uL 无
补超纯水到 28 uL 28 uL 28 uL
MMLV-Taq Mix 2 uL 2 uL 2 uL
4. 轻柔混匀后上机，按下面参数进行 RT-PCR。
过程 温度 时间
逆转录 60℃ 30 分钟
预变性 94℃ 5 分钟
PCR 反应
（30 个循环）
94℃ 30 s
55℃ 30 s
72℃ 30 s
延伸 72℃ 5 分钟
5. 电泳检测 RT-PCR 产物。预期的 PCR 产物长度为 286 bp。